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魚ELISA試劑盒可以利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用

更新時(shí)間:2018-05-28      瀏覽次數(shù):1852
魚ELISA試劑盒技術(shù)雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研究與診斷,但是熒光抗體染色標(biāo)本不能長期保存,對(duì)組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)分辨不清,免疫酶技術(shù)則能克服上述不足,標(biāo)記免疫酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法,對(duì)石蠟切片標(biāo)本尤為適用,為免疫病理研究開辟了一條新途徑,酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度,經(jīng)過適當(dāng)處理還可以進(jìn)行免疫電鏡觀察,免疫酶組化技術(shù)分為酶標(biāo)記法與非標(biāo)記抗體技術(shù),前者是將酶通過交聯(lián)劑結(jié)合在抗體分子上,形成酶標(biāo)記抗體。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體連接進(jìn)行的免疫反應(yīng),稱為非標(biāo)記抗體酶技術(shù)。
魚ELISA試劑盒技術(shù)利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價(jià)格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存,價(jià)格低廉,有色產(chǎn)物易于測(cè)定,光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
魚ELISA試劑盒技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測(cè)定過程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng),加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。
魚ELISA試劑盒的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是還能兼作反應(yīng)的容器,zui后放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過程中使圓珠滾動(dòng)淋洗,效果更好。zui常用的載體為微量反應(yīng)板,于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
1、魚ELISA試劑盒基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
2、魚ELISA試劑盒基因工程
較早用于免疫測(cè)定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn),較好地解決了抗HBc和HBe的測(cè)定問題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難,并且這一點(diǎn)對(duì)于難培養(yǎng)的病原微生物來說,如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。
魚ELISA試劑盒HCV目前尚不能體外培養(yǎng),只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷,已知HCV基因組有7個(gè)功能區(qū)組成:核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5(有分為NS和NS5b)區(qū),合成抗原的優(yōu)點(diǎn)是易于純化,特異性好,抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。 
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