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ELISA實(shí)驗(yàn)不要疏忽這些操作細(xì)節(jié)

更新時(shí)間:2017-02-05      瀏覽次數(shù):2411

ELISA實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。  下面將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題解決辦法總結(jié)如下:試劑要選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。標(biāo)本收集與保存:避免使用肉眼可見的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本;2-8℃下,標(biāo)本可放置24-48小時(shí),長期保存需放置-20℃下,請(qǐng)避免反復(fù)凍融。  
具體請(qǐng)參照:       
1.洗滌液:用前配制,有的試劑盒會(huì)標(biāo)明,配好的4度下一般可以放一個(gè)月,如果沒有標(biāo)明,盡量用新鮮的,不要多配制;
2.顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制;  
3.標(biāo)準(zhǔn)品:有的試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的,4度保存,有的是要現(xiàn)配制的,按照說明書操作;  
4.濃縮生物素結(jié)合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用(用前15分鐘配制);原則是試劑盒上沒有指出配制物的儲(chǔ)藏方式的話,應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠;
5.加 樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時(shí)間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑,加樣對(duì)數(shù)據(jù)的影響比較大,特別要注意加樣問題。  
不好的操作原因:不會(huì)正確使用加樣器; 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

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